從樣品中提取你的靶蛋白

蛋白分析的第一步是蛋白提取，這就需要釋放不同來(lái)源樣品中的蛋白質(zhì)。無(wú)論通過(guò)機(jī)械處理還是基于去垢劑的提取方法，都會(huì)不可避免地破壞細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致蛋白降解或不穩(wěn)定。因此，提取過(guò)程中蛋白的完整性直接決定了下游蛋白樣品分析所得數(shù)據(jù)的質(zhì)量。例如，某些提取方法可能在細(xì)胞裂解和細(xì)胞內(nèi)含物的溶解方面有效，但可能會(huì)導(dǎo)致蛋白變性，影響天然蛋白相互作用的檢測(cè)和分析。

樣品類型

培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，哺乳動(dòng)物組織和原代細(xì)胞是生理相關(guān)的內(nèi)源性蛋白（包括翻譯后修飾）研究，以及過(guò)表達(dá)系統(tǒng)（瞬時(shí)或穩(wěn)態(tài)）的常見(jiàn)樣品來(lái)源。當(dāng)提取哺乳動(dòng)物組織中的蛋白質(zhì)時(shí)，需要一些溫和的酶或機(jī)械破碎手段來(lái)幫助從較復(fù)雜組織基質(zhì)中分離細(xì)胞。對(duì)于僅通過(guò)質(zhì)膜將細(xì)胞內(nèi)容物與環(huán)境隔離開(kāi)的培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞和原代細(xì)胞來(lái)說(shuō)，試劑中的去垢劑可打破蛋白-脂質(zhì)膜雙層結(jié)構(gòu)，使總蛋白提取更為容易。通常所研究的或用于重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)的其他生物體包括細(xì)菌、酵母和植物。這些細(xì)胞類型含有細(xì)胞壁，需要額外使用酶解或機(jī)械破碎的方法才能有效釋放蛋白。然而，目前已開(kāi)發(fā)出基于去垢劑的解決方案，可有效提取和溶解這些細(xì)胞中的蛋白，而無(wú)需機(jī)械外力破壞。該方法對(duì)于處理更多樣品數(shù)量或使用自動(dòng)提取和純化方案來(lái)說(shuō)尤其重要。

蛋白提取適用于 各種動(dòng)物、植物細(xì)胞和組織及細(xì)菌、真菌、酵母等樣本。

亞細(xì)胞分級(jí)分離

對(duì)于大多數(shù)研究來(lái)說(shuō)，只需直接制備全細(xì)胞裂解物以獲取可溶蛋白樣品，用于下游直接檢測(cè)或進(jìn)一步純化與分離。但是，如果在蛋白提取之前將細(xì)胞分為不同的區(qū)室或細(xì)胞器，可以顯著提高特定蛋白的產(chǎn)量或富集率。機(jī)械裂解通常會(huì)破壞所有細(xì)胞區(qū)室，使分離特定細(xì)胞組分變得更加困難。但是，通過(guò)謹(jǐn)慎優(yōu)化試劑，已開(kāi)發(fā)出基于逐級(jí)差異去垢劑的方法來(lái)分離核蛋白、胞質(zhì)蛋白和膜蛋白組分。該方法可以將疏水性膜蛋白溶解，使其與親水蛋白分離，并且可以分離完整細(xì)胞核、線粒體和其他細(xì)胞器，用于直接研究或分步提取蛋白。

針對(duì)細(xì)胞核、胞質(zhì)、線粒體、溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、外泌體等細(xì)胞不同部位的細(xì)胞器分離試劑盒。